大家在平時液相分析工作中,是否碰到過基線噪音干擾?莫名的基線波動、波浪狀噪音或基線漂移等問題?
此次為大家總結了液相實驗中可能出現的基線噪音問題,以及如何減小和消除噪音。
A.基線噪音大:
1.流動相中有氣體– 溶劑脫氣
2.流動池中有氣泡 – 在出口處使用0.009”的管路
3.色譜柱上的污染物被洗脫– 平衡系統,直至基線穩定;如樣品中有保留非常強的組分,可設置強洗脫程式
4.滲漏 – 此時應修復滲漏,重新連接或更換接頭
5.檢測器燈能量低 – 更換燈
6.靈敏度太高 – 使用合適的採樣頻率,調節增益(如ELSD檢測器)
7.檢測器流動池髒 – 清潔流動池
8.電噪音 – 除去電噪音的來源:遮罩電纜,清潔觸點
9.採樣頻率設置過大 – 一味追求高採樣頻率,可能對靈敏度沒有任何幫助,同時也會產生比較大的噪音:UV檢測器推薦降低採樣頻率,HPLC推薦1-5HZ,UPLC推薦20HZ
B.同步的基線噪音Synchronous noise (最常遇見)
1.大多數情況下都是泵引起的,泵頭中存在空氣 – 將溶劑脫氣,並重新灌注泵
2.單向閥問題 – 超聲清洗單向閥或更換
3.柱塞杆斷裂 – 更換
4.混合問題 – 更換一個體積更大的Mixer,以增加系統體積
5.電噪音 – 改變電路,除去來源
C.不同步的基線噪音Asynchronous noise
1.氣泡 — 流動相要脫氣
2.檢測器中有氣泡/空氣 — 流動相脫氣,或在檢測器的後面加反壓(不適用於RI檢測器)
3.滲漏— 特別是肉眼無法發現的微漏或者泵的內漏,會造成流速的變化和混合比例的變化,從而導致基線噪音,此時應修復滲漏,重新連接或更換接頭
4.管路堵塞 — 除去堵塞,沖洗系統
5.電噪音 — 除去來源,改變電路
D.基線漂移Drift:上漂或者下漂
1.梯度變化引起,如溶劑B的吸收值高於溶劑A – 使用基線差減,或嘗試新的流動相
2.化合物從色譜柱上洗脫 – 平衡系統,直至基線穩定;如樣品中有保留非常強的組分,可設置強洗脫程式
3.溶劑改變(氣體吸附,蒸發)– 氦氣脫氣,隔離溶劑
4.溶劑滲漏 – 擰緊或者更換接頭
5.檢測器溫度影響(尤其是示差,電化學以及電導檢測器) – 流動池溫度調節
6.柱溫波動 – 等待柱溫平穩,使用柱預加熱器
7.壓力變化 – 過濾溶劑以及樣品,或樣品太粘稠
8.混合問題 – 更換一個體積更大的Mixer,以增加系統體積
總結:
確保無電源及電噪音干擾;
為避免基線噪音,確保儀器系統內無氣泡或空氣,流動相首選過濾脫氣;排儘管路、進樣器、檢測池中的氣泡;選擇合適的接頭和管路,防止滲漏;
在編輯方法時,針對HPLC和UPLC儀器UV檢測器設置合適的採樣頻率,HPLC推薦1-5HZ,UPLC推薦20HZ;
保持良好的操作習慣,如UPLC儀器水相流動相每天更換,添加了緩衝鹽的流動相過0.2 μm溶劑過濾膜等,都會減小基線噪音的產生。
資料來源:上海沃特世
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