隨著HPLC的普及，分析方法學的開發成為一個合格的分析研究員的標配，而Column的篩選是分析方法開發的第一步，也是最重要的一步，優秀的分析研究員可以根據化合物的結構特徵很快確立所需的Column。然而，Column的使用或保養不當時，常造成分析者的困擾，所以如何正確使用Column，也是分析源重要課題之一，以下是Column活化以及保存的建議
活化
1.樣品配置
a. 建議樣品之配製以移動相(mobile phase)作配置。
b. 若樣品無法溶解於移動相中，請確認溶解樣品之溶劑可與移動相互溶以避免樣品沉澱或形成鹽類
c. 以0.45 um 或是 0.2 um濾膜過濾樣品以除去雜質
2.安裝
a. 小心拿取column，不要使column掉落或受到重擊，否則可能會破壞充填物分佈而影響分離效果
b. 連結column與1/16” 不鏽鋼管 (tubing) /peak管時，請連結密合無細縫，以獲得最佳的分析圖譜
c. 如果在不鏽鋼螺帽、套環與末端管件間，有滲漏現象，請更換新的螺帽、套環及tubing
d. 若在末端管件和column之間有滲漏現象，請分別置扳手於管柱本體及末端管件六角形頭鎖緊
e. 使用前必先檢查column的流向 (其流向箭頭在column上有標示)
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3.平衡 a. Purge HPLC Pumping system，直至完全無氣泡後，連接column Inlet 至 Injector outlet，開啟Pump，設定流速為0.1 ml/min，當Delta Pressure 低於45 psi時，緩慢升流速，直到至1.0ml/min。 b. 觀察column outlet 處，當solvent已流動得很順暢，再將column outlet與detector連結起來 c. 平衡column所需使用的移動相量 (flush volume)，最少需分析管柱體積 (column volume)之10倍的體積量以上。(參考下表) 以4.6 x150 mm為例，流速1.0 mL/ min，至少要25分鐘的平衡時間才足夠 d. 當背壓穩定，基線 (Baseline) 飄移亦不大後，即已平衡，可進行分析
管柱清洗與保存 當分析物Peak之滯留時間偏移、解析度降低或是背壓過高時，可能是表示column 已受到污染。 a. 有Guard column，每經過一段時間就需更換，因其已受到汙染或阻塞。當系統的背壓持續高至限度時，這通常代表了guard column需作更換。或是column前端的濾片作更換，因汙染物在進入column時會被濾片阻隔，附著於濾片之上。 b. 若流洗有機溶媒並未解決汙染的問題，可試著用Gradient清洗管柱，舉例來說，變換100% H2O =>50/50 H2O/ACN =>100% ACN，以完成整個清洗手續。 c. 檢查壓力是否回到正常值，若是清洗成效不彰，可以試著逆洗管柱，使卡在column前端的污染物能被移動相流洗帶走 保存 不要讓buffer、酸性或鹼性流洗液在column內存在太長的的時間。Column 保存前先以10倍column volumn之超純水流洗column，洗掉buffer、酸性或鹼性流洗液，再以COA建議的保存溶液流洗column後便可保存。請將column完全密封起來，以避免column內的保存液揮發而使充填材乾涸。每支column皆提供密封用栓塞。
注意事項 pH range 除了一些適用於特殊pH範圍之columns外，一般管柱的pH耐受性在pH2~7之間，建議移動相 (包括緩衝溶液) 及樣品之pH值需調整在pH2~7之間。 pH<2，會造成鍵結C18之水解，pH>7，時鹼性溶液接觸到silica gel會致使 silica 溶解，造成 column 失去分析能力 Temperature 30℃ ~50℃ 為column建議使用之溫度。在此範圍之溫度下可增強選擇性 (selectivity)，降低溶劑的黏稠度，增加樣品注射之再現性，及提高樣品成分之質能傳遞 (Mass transfer)
Troubleshooting (針對管柱) 系統背壓升高 原因: Column污染 將column以逆洗的方式，流洗10~20倍column volume之溶媒，若column前端濾片塞住了，請換新的濾片 Peak解析值降低 原因: Column污染 請以100%有機相溶媒流洗管柱，以除去汙染物。但流洗過有機相後，請將有機相完全置換回來 (以至少20倍column volume 之溶液流洗管柱，以確保有機溶媒不再存在於管柱中，並達到完全的平衡)。 Peak tailing 原因：請確認column每一聯結的部分是否都有聯接好，確認column與tubing間之nuts、ferrules是否位置、聯結都有鎖緊。若仍無效，請更換新的column
資料來源:Watersc和YMC
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