初階水電工

當Waters Alliance 2695系統出現進樣面積再現性不佳（%RSD>2）的問題時（請先確認保留時間的再現性沒有問題），可以做以下診斷以確定故障原因。峰面積再現性差的診斷可從儀器硬體故障原因和色譜方法原因兩個方面考慮。

儀器使用及硬體原因

下圖是Alliance系統進樣器的流路示意圖，通過三個閥的切換，完成樣品的進樣。由圖中分析，問題可能出現在3個地方

注射器 (Injector)，如果進樣注射器裡有氣泡，則會導致吸樣量不準確使再現性變差。

V1、V3閥出現滲漏造成再現性問題。

針密封圈元件的密封出現問題，造成進樣精密度變差。

觀察進樣器是否有氣泡或漏液

遇到進樣再現性不好的時候，首先打開Alliance面板旁邊的小門，檢查注射器是否有氣泡或漏液，如注射器漏液需報修，請工程師更換；如果有氣泡需按以下操作排氣泡。

每天做實驗前，Alliance系統需要四步操作。

prime seal wash

prime needle wash

wet prime

purge injector

選擇已灌注的管路，進行Purge Injector操作。如果流動相中含有緩衝鹽，長時間運行之後，需灌注注射器。灌注溶液時先用100%純水，再使用100%純甲醇或乙腈-水（50：50）。選擇已完成濕灌注的管路。在Alliance系統面板上選擇“Menu/Status”，點擊“Direction Function”，選擇“Purge Injector”。

一般選擇6倍loop環體積的液體量進行灌注清洗，設完後，點擊“OK”即可。Purge時應觀察注射器內氣泡是否排除。

稱重法

峰面積的再現性不好可能是進樣器引起的，如果懷疑進樣量不準確，可以用稱重法來檢驗。進樣前，建議先用甲醇清洗注射器2～3次，清洗過程中確認注射器無氣泡、不漏液，以甲醇為流動相，平衡至壓力平穩。用樣品瓶裝滿水，先稱重量，然後連續進6針50ul水再稱重，如果重量沒有變化，說明樣品沒吸進去。連續做6次，如果6次失重的50± 2 uL，說明進樣系統(Injector)可能有問題。

1.3 針密封度校正測試

如果確認沒有氣泡，並且V1和V3閥沒有漏液，可以考慮對Alliance系統的針密封系統進行校正（seal pack測試）。

做seal pack測試前，需要接上色譜柱，以100%甲醇為流動相，1.0 ml/min的流速運行至壓力穩定（1200 psi左右），按以下步驟進行操作：在Alliance面板上選擇“Diag”選項卡，點擊“Adjust Seals”，重複做兩次，如果結果一致，保存校正結果。

確認密封件資料值 （頂部、底部和寬度）在下表所示的可接受範圍內。

如果“adjust seal”校正失敗，請打電話報修，由工程師上門進行維護。

層析方法原因

層析方法原因主要包括三個方面：管柱，樣品瓶中的樣品量不夠，以及由於基線波動較大，積分不準確造成再現性較差。解決辦法如下。

2.1 色譜柱原因

由於管柱使用時間過長，造成柱效下降，引起層析峰拖尾，所以導致峰面積再現性不佳。首先考慮是否是由於管柱引起，可以用標準品進行柱效測試或更換管柱進行檢查。

2.2 樣品瓶裝載合適的樣品量

Alliance系統的進樣針為側面抽吸設計，因此需要樣品瓶溶液的量要足夠，尤其是在做大體積多針重複進樣時，需要保證樣品體積在1.0至1.5mL左右。

樣品裝液量需高於0.5 mL刻度線。但是不能完全裝滿，以免造成吸樣精度不準確。

2.3 基線波動較大引起峰面積再現性差

在積分的時候，由於基線噪音較大，會造成積分起點及終點的不一致，導致峰面積相差較大，故再現性較差。

總結

對於Alliance系統可能出現的再現性問題，應該按照從簡到難的順序，依次檢查樣品瓶、注射器、管柱、層析方法等因素，在確定對系統硬體進行檢查沒有問題的基礎上，再排查方法問題。每次開機後，為保證再現性，一定要做“purge injector”，保證進樣注射器中沒有氣泡。

當所有能做的檢查做完後仍然不能判斷出故障時，請致電工程師上門解決。

資料來源:美商沃特斯